雙光(guang)束紫外-可見分光(guang)光(guang)度計核(he)查操作規(gui)程工(gong)作原理

　　紫外可(ke)見分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度法(fa)是利用物(wu)(wu)質分(fen)子對紫外可(ke)見光(guang)(guang)譜區(qu)的(de)輻(fu)射的(de)吸收來進行分(fen)析的(de)一種儀器(qi)分(fen)析方法(fa)。這種分(fen)子吸收光(guang)(guang)譜產生于(yu)價電子能級的(de)躍(yue)遷，它廣泛用于(yu)無機(ji)和有機(ji)物(wu)(wu)質的(de)定性和定量分(fen)析。

　　雙光(guang)束(shu)紫外(wai)-可見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)朗伯一一比(bi)耳(er)定律（Lambet -Beer）是光(guang)吸(xi)(xi)收(shou)的(de)(de)基本定律，俗稱光(guang)吸(xi)(xi)收(shou)定律，是分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)定量分(fen)析的(de)(de)依據和基礎(chu)。當入射光(guang)波長一定時，溶(rong)液的(de)(de)吸(xi)(xi)光(guang)度(du)是吸(xi)(xi)光(guang)物質(zhi)的(de)(de)濃度(du)c及吸(xi)(xi)收(shou)介(jie)質(zhi)厚度(du)（吸(xi)(xi)收(shou)光(guang)程）的(de)(de)函數。其常用(yong)表達式如(ru)下（式中ε為系數）：

　　A=ε·c·l

 　　雙(shuang)光束(shu)紫外-可(ke)(ke)(ke)見分(fen)(fen)(fen)光光度(du)計(ji)是基于(yu)紫外可(ke)(ke)(ke)見分(fen)(fen)(fen)光光度(du)法的(de)原(yuan)理工作(zuo)的(de)常規分(fen)(fen)(fen)析儀器。根據光路(lu)設計(ji)的(de)不(bu)同，紫外可(ke)(ke)(ke)見分(fen)(fen)(fen)光光度(du)計(ji)可(ke)(ke)(ke)以分(fen)(fen)(fen)為單(dan)光束(shu)分(fen)(fen)(fen)光光度(du)計(ji)、雙(shuang)光束(shu)分(fen)(fen)(fen)光光度(du)計(ji)和雙(shuang)波(bo)長分(fen)(fen)(fen)光光度(du)計(ji)。

　　1.2 適(shi)用范圍

　　雙(shuang)光(guang)(guang)束(shu)紫外-可見分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計（以下簡稱儀(yi)器(qi)(qi)(qi)），系指從(cong)單色器(qi)(qi)(qi)發(fa)出(chu)的單色光(guang)(guang)經光(guang)(guang)束(shu)開關（斬光(guang)(guang)器(qi)(qi)(qi)）分(fen)成為(wei)樣品和參比(bi)兩條(tiao)光(guang)(guang)束(shu)結構的儀(yi)器(qi)(qi)(qi)。它(ta)能消除光(guang)(guang)源不穩和放大器(qi)(qi)(qi)增益變化(hua)的影響，并能自動記錄和掃描物(wu)質的吸(xi)收光(guang)(guang)譜圖。儀(yi)器(qi)(qi)(qi)在開機后(hou)通常(chang)會做一些(xie)自檢(jian)，但仍應按本(ben)規程進(jin)行(xing)檢(jian)定(ding)。儀(yi)器(qi)(qi)(qi)的波長范(fan)圍包括(kuo)195~800nm，狹縫為(wei)0.1~5nm可調。

　　1.3 制定依據

　　本規(gui)程主要參照國家(jia)計量檢定規(gui)程《JJG 178-2007紫外、可見、近紅外分光(guang)光(guang)度計》、《JJF 1641-2017紫外可見分光(guang)光(guang)度計型式評價大綱》及《中國藥(yao)典》2015年版四部指導通則0401紫外-可見分光(guang)光(guang)度法(fa)擬定。

　　2.項目及技術要求

 　　2.1 波(bo)長準確度 ≤±1.0nm（紫外光(guang)區），≤±2.0nm（500nm附近）；

　　 波長(chang)重復性 ≤0.5nm。

　　2.2 基(ji)線平直度 ≤0.01 吸光度。

　　2.3 0%線噪(zao)聲(sheng) ≤0.1%，100%線噪(zao)聲(sheng) ≤0.5%.

　　2.4 吸(xi)光度(du)準確度(du) 應(ying)符合規定。

　　2.5 雜散光 <0.8%。

　　2.6 光譜帶(dai)寬 ≤標示帶(dai)寬±20%。

　　2.7 吸(xi)收池配對誤(wu)差(cha) ≤0.5%。

　　3 檢(jian)測條件

　　3.1 環境條(tiao)件(jian)

　　3.1.1 室溫為10~30℃，相對濕度應小于65%。

 　　3.1.2 工作(zuo)臺不受陽光直(zhi)射，室內(nei)應無腐(fu)蝕性(xing)或(huo)其它(ta)影(ying)響測定的(de)氣體干擾。

　　3.1.3 周(zhou)圍應無影響檢定的強電場、磁場和震動。

　　3.1.4 儀器檢定(ding)前，須先開機預熱半小時。馬弗爐

　　3.2 設備(bei)

　　鈥玻璃校正片。

　　3.3 標準物質和試劑

　　氧(yang)化鈥（分(fen)(fen)析(xi)純(chun)）、高氯酸(suan)（分(fen)(fen)析(xi)純(chun)）、重鉻(ge)酸(suan)鉀（基準品）、硫酸(suan)（分(fen)(fen)析(xi)純(chun)）、碘(dian)鈉(na)（分(fen)(fen)析(xi)純(chun)）、亞硝酸(suan)鈉(na)（分(fen)(fen)析(xi)純(chun)）。

　　4 檢測方法

　　4.1 波長(chang)準確度和波長(chang)重(zhong)復性的檢(jian)測(ce)

　　4.1.1 用(yong)氧(yang)(yang)化(hua)鈥(huo)溶(rong)液的241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64和640.52nm的吸(xi)收值(zhi)(zhi)(zhi)進行檢(jian)定。檢(jian)定時先配制4%氧(yang)(yang)化(hua)鈥(huo)的10%高氯酸溶(rong)液，將儀器(qi)波(bo)長設置為700~200nm范(fan)圍，狹縫(feng)小于1nm，以(yi)(yi)空氣為空白，調節透光(guang)率(lv)為100%。取上述(shu)氧(yang)(yang)化(hua)鈥(huo)溶(rong)液，置1cm石英吸(xi)收池中(zhong)，放(fang)入樣(yang)品光(guang)路，以(yi)(yi)適當(dang)的掃描(miao)速度繪(hui)制氧(yang)(yang)化(hua)鈥(huo)溶(rong)液的吸(xi)收圖譜并打印(yin)出峰值(zhi)(zhi)(zhi)，與規定值(zhi)(zhi)(zhi)相比較(jiao)。重復測定三次，取平均值(zhi)(zhi)(zhi)，計算波(bo)長準確度與重復性。

　　4.1.2 用鈥(huo)(huo)玻(bo)璃(li)校正(zheng)片代替氧化鈥(huo)(huo)溶(rong)液，測定方法同上，其尖銳吸收峰主要(yao)有279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2和637.5nm，校正(zheng)片使用前必須經(jing)過校正(zheng)。

　　4.2 基線平直(zhi)度的(de)檢(jian)測(ce)

　　4.2.1 按儀(yi)器(qi)要求進行基線校正(zheng)后(hou)，調節狹縫2nm，掃描速(su)度中(zhong)速(su)，取樣(yang)間(jian)隔1nm，樣(yang)品和參比光路均為空氣。在儀(yi)器(qi)波長(chang)下限(xian)處加10nm，波長(chang)上限(xian)處減50nm范圍(wei)內進行掃描，測量圖譜(pu)中(zhong)起(qi)始點(dian)的吸光度與圖譜(pu)中(zhong)偏(pian)離起(qi)始點(dian)多的吸光度（即大偏(pian)離點(dian)）之差即為基線平直度。

　　4.2.2 允(yun)許繪制的(de)基線在更換光(guang)源(yuan)或濾光(guang)片時(shi)微有跳動，必要(yao)時(shi)可(ke)在檢定前再(zai)進行一(yi)次(ci)基線校正。

　　4.3 0%線噪(zao)聲和100%線噪(zao)聲的測(ce)定

　　4.3.1 儀器(qi)設(she)置為時間掃描方式，波長設(she)置為250nm，狹縫1nm，樣(yang)品和參比光(guang)路均(jun)為空氣，調整(zheng)透光(guang)率為100%，用適當(dang)的掃描速(su)度(du)做時間掃描2分(fen)鐘，觀(guan)察100%線(xian)的變化，然后再將擋光(guang)塊插入樣(yang)品光(guang)路，觀(guan)察0%線(xian)的變化2分(fen)鐘，讀出各(ge)自峰的大（谷(gu)）值的差，與(yu)規定值比較。

　　4.3.2 儀器(qi)設置(zhi)時間掃描方式，波長(chang)置(zhi)500nm，按(an)上述方法測(ce)定(ding)500nm波長(chang)處的(de)100%和0%線噪聲(sheng)。

　　4.3.3 如儀器(qi)無(wu)時間掃描方式，也(ye)可將儀器(qi)波長調(diao)至(zhi)規定處，用目視觀察2分鐘(zhong)，讀出各自峰的(de)大（谷）值的(de)差(cha)。

　　4.4 吸(xi)光度(du)準確(que)度(du)的(de)(de)檢測 將儀(yi)器(qi)波長(chang)設置于400~200nm，狹縫1nm，先(xian)用配對的(de)(de)吸(xi)收池均裝入0.005mol/L硫(liu)酸空白(bai)溶(rong)(rong)液(ye)，用合適的(de)(de)掃(sao)描速度(du)記錄基(ji)線或自(zi)動(dong)校(xiao)正基(ji)線，然后再將樣品光路改變放0.006%重(zhong)鉻酸鉀硫(liu)酸溶(rong)(rong)液(ye)0.005mol/L硫(liu)酸空白(bai)溶(rong)(rong)液(ye)，掃(sao)描并打印峰谷值(zhi)，計算吸(xi)收系(xi)數(shu)，重(zhong)復測定三次，取其平均值(zhi)與規定的(de)(de)吸(xi)收系(xi)數(shu)許可范圍進行比較，應(ying)符(fu)合表中的(de)(de)規定。

　　波長（nm）

　　235

　　（小）

　　257

　　（大）

　　313

　　（小）

　　350

　　（大）

　　吸(xi)收(shou)(shou)系(xi)數（百分吸(xi)收(shou)(shou)系(xi)數）的規定值

　　124.5

　　144.0

　　48.6

　　106.6

　　吸收系數（百分吸收系數）的許(xu)可(ke)范圍

　　123.0~126.0

　　142.8~146.2

　　47.0~50.3

　　105.5~108.5

　　4.5 雜散光(guang)的檢查

　　測定(ding)前應將擋光(guang)塊(kuai)插入樣品池，校正儀器零點，其透光(guang)率應為0.0%。按(an)下表列(lie)的(de)試(shi)劑和濃度，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中(zhong)，在規(gui)定(ding)的(de)波長處測定(ding)透光(guang)率，應符(fu)合表中(zhong)規(gui)定(ding)。

　　試劑

　　濃度（%）

　　測定用(yong)波(bo)長（nm）

　　透光率（%）

　　碘鈉

　　1.00

　　220

　　<0.8%

　　亞硝酸鈉

　　5.00

　　340

　　<0.8%

　　4.6 光譜帶(dai)寬的測(ce)定

　　4.6.1 將(jiang)儀器(qi)置于(yu)單光(guang)束能量測(ce)定方式，波長(chang)范(fan)圍置于(yu)660~650nm，選擇小狹縫，用(yong)合適(shi)的掃(sao)描速度(du)進行波長(chang)掃(sao)描，繪(hui)制氘(dao)(dao)燈譜(pu)線(xian)，并(bing)使氘(dao)(dao)燈峰(feng)值為滿量程的三分(fen)之一，測(ce)量氘(dao)(dao)峰(feng)的半峰(feng)寬即為小光(guang)譜(pu)帶寬，與規(gui)定值比較。

 　　4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm（或(huo)253.7nm）的特征譜線同(tong)4.6.1方法掃描并計算(suan)。

　　4.7 吸收池配對(dui)誤差的檢(jian)測

　　4.7.1 取洗(xi)凈的(de)石英吸(xi)(xi)收(shou)池(chi)盛滿水，在(zai)220nm處，以(yi)其中一(yi)只透光率為100%，再(zai)分(fen)別(bie)(bie)更換其它吸(xi)(xi)收(shou)池(chi)，測(ce)其透光率，凡(fan)誤差在(zai)規定(ding)范圍(wei)內的(de)，再(zai)分(fen)別(bie)(bie)裝入0.006%重鉻(ge)酸鉀的(de)0.005mol/L硫酸溶液，在(zai)350nm處，以(yi)其中一(yi)只透光率為100%，分(fen)別(bie)(bie)測(ce)定(ding)其它吸(xi)(xi)收(shou)池(chi)，凡(fan)透光率誤差在(zai)規定(ding)范圍(wei)內的(de)即(ji)為配對的(de)吸(xi)(xi)收(shou)池(chi)。

　　4.7.2 取(qu)洗凈(jing)的(de)(de)玻璃吸(xi)收(shou)池盛滿水，在(zai)(zai)660nm處，以其(qi)(qi)中一只(zhi)透光(guang)率(lv)(lv)為(wei)(wei)100%，再(zai)分(fen)別(bie)更換其(qi)(qi)它吸(xi)收(shou)池，測其(qi)(qi)透光(guang)率(lv)(lv)，凡誤差(cha)(cha)在(zai)(zai)規定(ding)(ding)范圍內(nei)的(de)(de)，再(zai)分(fen)別(bie)裝入(ru)0.006%重鉻酸鉀(jia)的(de)(de)0.005mol/L硫酸溶液，在(zai)(zai)400nm處，以其(qi)(qi)中一只(zhi)透光(guang)率(lv)(lv)為(wei)(wei)100%，分(fen)別(bie)測定(ding)(ding)其(qi)(qi)它吸(xi)收(shou)池，凡透光(guang)率(lv)(lv)誤差(cha)(cha)在(zai)(zai)規定(ding)(ding)范圍內(nei)的(de)(de)即為(wei)(wei)配對的(de)(de)吸(xi)收(shou)池。

　　4.7.3 由于吸收池在不同(tong)波長吸光度有少許改變，在使用時，先(xian)測定配(pei)對誤(wu)差，必要時應扣除。

　　5 檢測結果處理

　　自(zi)檢結(jie)果(guo)全部(bu)符合技術要求者，即為合格，可以使用。若檢測結(jie)果(guo)不符合規定，應重新調試儀器再進行自(zi)檢，符合規定后(hou)方可使用。

　　6 檢驗周期(qi)

　　應至少每年檢(jian)測一次，重要(yao)部(bu)件的(de)(de)維修和更換、變動放置地(di)點、或對儀器性能有懷疑的(de)(de)，應按本規(gui)程隨時(shi)進行自檢(jian)。